1、《猫和老鼠》主要人物包括：汤姆（猫）、杰瑞（鼠）、两只鞋太太（人）、泰菲（鼠）、布奇（猫）等。
2、汤姆（猫）总是闪着机会主义的光芒，弓着腰在一旁等待机会出击杰瑞。在动画片中，它总有一种强烈的欲望，总想抓住与它同居一室却难以抓住的老鼠杰瑞。但总是遭到失败。
3、杰瑞（鼠）总是用挑逗的眼神看着镜头，并且常常在不经意期间玩弄汤姆。因为杰瑞古灵精怪，所以经常能成功的戏弄汤姆且让他糗事百出，不过有时他也会被汤姆戏弄，时而在戏弄汤姆的同时也会享受到汤姆对它的关心，让它感动。
4、两只鞋太太（人）动画中汤姆猫的几种不同主人中最常出现的一位，经常处理两位主角在自己家中所制造的麻烦。由于视角问题，镜头只能看到她腰以下的部位。在动画中的设定大约40岁左右，身材粗壮的大妈形象。1952年之后不再登场。
5、泰菲（鼠）一个由杰瑞收养的小灰鼠弃儿，个体娇小可爱，通常穿白色尿布，非常贪吃，会讲法语，无时无刻不在卖萌。
6、布奇（猫）一只肮脏的流浪猫，总想捉到杰瑞，因此有时会与汤姆合作，但更多时候却与汤姆为敌（大多是成为情敌）。登场的时候经常唱的歌曲是绿野仙踪的插曲《在彩虹上》。
